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Hibridación de ADN: técnicas para pruebas cromosómicas

abril 27, 2020
profesor-de-biologia - la hibridacion biologia

La hibridación fluorescente in situ (FISH) es una técnica citogenética que utiliza sondas fluorescentes para detectar deleciones y duplicaciones en secuencias de ADN o cromosomas. El término citogenético Se utiliza para describir la rama de la genética que estudia la estructura y la función de la célula humana, especialmente los cromosomas. Fue desarrollado a principios 1980 por investigadores biomédicos para perfeccionar características específicas de ADN para su uso en asesoramiento genético, medicina e identificación de especies. FISH también se utiliza para detectar objetivos específicos de ARN (ácido nucleo ribonucleico) en células humanas, en muestras de tejido y células tumorales.

Para comprender la hibridación fluorescente in situ, necesitamos comprender un poco sobre el ADN y los cromosomas.

Los cromosomas son estructuras dentro de las células del cuerpo humano que contienen el ADN (ácido desoxirribonucleico) o la codificación genética que le dice al cuerpo su desarrollo y funciones. El cuerpo humano tiene cromosomas 46, dispuestos en pares 23; cada par tiene un cromosoma de cada padre ordenado secuencialmente desde los números 1 a 22. El último par de cromosomas determina el género: XX para niñas y XY para niños. Las pruebas citogenéticas o cromosómicas se realizan cuando es necesario identificar cambios en el número y la estructura del material genético y buscar ganancias (duplicaciones) y pérdidas (eliminaciones) para comprender los defectos congénitos, las capacidades de desarrollo y las discapacidades en humanos.

Los científicos e investigadores clínicos ven y estudian los cromosomas bajo el microscopio mediante el proceso de tinción y aumento. Esto les ayuda a buscar cambios al estudiar los patrones de bandas y las formas de los cromosomas; Si hay grandes cambios, desequilibrios y reordenamientos, también conocidos como duplicaciones y deleciones) que involucran una parte del cromosoma o la totalidad, se pueden ver. Sin embargo, incluso las pequeñas ganancias y pérdidas de material genético son de gran importancia y, a veces, incluso los científicos clínicos más experimentados y calificados pueden perderse estos pequeños cambios a través de una prueba cromosómica de rutina.

Aquí es donde entra la hibridación fluorescente in situ (FISH). Utiliza un químico que brilla intensamente (fluorescencia) para detectar el área específica de un cromosoma que necesita ser estudiado. Usando un microscopio especial, un científico puede identificar si hay duplicaciones y eliminaciones de material de ADN. La técnica utiliza sondas con marcadores fluorescentes adheridos complementarios a partes específicas de cadenas de ADN, que cuando se calienta desnaturaliza o separarse permitiendo que las sondas hibridan su secuencia complementaria del ADN. En términos simples, la sonda se unirá (hibridará) a la muestra si hay alguna mutación genética en el material de ADN; Si no hay t ninguna, no lo hará.

Así que ahora entendemos que con hibridación & # 39 ;, podemos detectar la ausencia de presencia de genes específicos mutaciones en los cromosomas que pueden ayudar a detectar una discapacidad, enfermedad o enfermedad.

Autenticación de línea celular

A línea celular Se utiliza para la investigación biológica y la experimentación. Estos son productos de células inmortales como las células cancerosas que pueden perpetuar la división indefinida, a diferencia de las células regulares que pueden dividirse hasta 50 veces aproximadamente. Estas células inmortales son extremadamente útiles porque están fácilmente disponibles como producto de investigación en laboratorios y no requieren recolección de células & # 39 ;, que se está adquiriendo tejido de un donante humano cada vez que un laboratorio necesita células para la investigación.

Las líneas celulares son los factores más importantes para estudiar la biología tumoral, especialmente en condiciones de laboratorio. Sin embargo, los riesgos de contaminación cruzada y la identificación errónea de las líneas celulares en los laboratorios es bastante alto. Especialmente en la investigación donde la integridad de los resultados es primordial, los procedimientos confiables para la autenticación e identificación de la línea celular deberían ser las medidas principales para el control de calidad. Mediante el uso de hibridación in situ con fluorescencia múltiple e hibridación genómica comparativa, se pueden revelar las similitudes genéticas entre las líneas celulares cultivadas y los tejidos tumorales correspondientes.

Revisiones extensas y bien documentadas de medidas preventivas y casos muestran que los tres métodos más útiles para la autenticación e identificación de líneas celulares son:

1. Cariología: cariotipo básico, cariotipo especial, marcador cromosomas, bandas de cromosomas G y C e hibridación fluorescente in situ.

2. Isoenzimas: extracción de proteínas e isoenzimas, separación e identificación de patrones y aplicación a la identificación entre especies.

3. Huella digital de ADN: perfiles de ADN y secuencias de bases, uso de secuenciación automática y detección de etiquetas fluorescentes.

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