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Cómo contar células usando un hemocitómetro

mayo 26, 2020
profesor-de-biologia - clases de biologia desde cero

Hemocitómetro
Hemocitómetro. Esa divertida palabra latina que acabas de escuchar. Aunque suena bien, ¿verdad? Pero sería más genial si supieras lo que significa. Estarías más fresco. Tengo una respuesta para eso, ¿quieres escucharla?

Qué es un hemocitómetro:
Es una herramienta utilizada en laboratorios biológicos para contar células. Consiste en una pieza de vidrio con una cámara cuadrada tallada, de una superficie específica. Cuando la suspensión de células de muestra de densidad desconocida se mezcla e introduce adecuadamente en el interior, las células se distribuyen uniformemente en la cámara. Las celdas en cada uno de los cuadrados se pueden contar y promediar, y los cálculos adecuados entregan la densidad de la celda y el número de celda si tiene el volumen original.

Lo que no es un hemocitómetro:
Definitivamente, no es una herramienta objetiva de conteo de células. En primer lugar, debe saber cómo se ven sus células. Si tienden a verse alargadas o redondas, grandes o pequeñas. Solo debe contar lo que parezca una celda del tipo que está cultivando. Cosas como virutas del fondo del matraz o restos del medio de crecimiento deben identificarse como tales. Luego, debe mantener consistentemente las mismas reglas de conteo a lo largo de cada conteo. No se sesgue para contar las celdas solo porque están tocando una línea si hubiera establecido que no se contarían las celdas en esa línea. Por lo tanto, debe asegurarse de estar debidamente capacitado y seguro de contar esas células específicas que desea contar hoy.

Preparación de la muestra:
Para preparar una muestra para el recuento celular, primero debe tener sus células en suspensión. Directo para las células no adherentes, más complicado para las células adherentes.

Una vez en suspensión, agregue azul tripán u otros tintes de viabilidad para diferenciar entre vivo y muerto si lo desea. Este volumen contará para su dilución, así que anótelo. Mezcle bien y agregue una pequeña cantidad en el espacio entre el hemocitómetro y el portaobjetos.

Conteo de células:
Lleve al microscopio y cuente las células (100 – 200 requeridas en total) en diferentes cuadrados pequeños. Intente mantener los recuentos distribuidos uniformemente dentro del cuadrado grande (es decir, don t cuente todos los cuadrados en la parte superior y ninguno en la parte inferior; si ha cometido un error al insertar la muestra, el error se amplificará al estar sesgado hacia el recuento de cuadrados superiores). Establezca una regla mediante la cual las celdas en las líneas superior y derecha, o líneas inferior e izquierda (o líneas superior e izquierda, o líneas inferior y derecha) se cuenten sistemáticamente, y las otras no.

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